隨著社會的發(fā)展、生活節(jié)奏的加快，**成為流行病之 一，其嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量，可誘發(fā)諸多**。蒙醫(yī)理論  認(rèn)為**的病因分為外因和內(nèi)因，外因系勞逸失調(diào)、思慮太 過、驚嚇、失血等，內(nèi)因系赫依琪素紊亂累及心臟白脈，大多屬“赫依病”范疇。前期研究［１－２］已表明，施灸赫依三穴對**模型大鼠有**作用，可降低**神經(jīng)系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)———ＮＯ 與 ＮＯＳ的活性。白細(xì)胞介素－６（ＩＬ－６）是具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，參與睡眠－ 覺醒過程，具有調(diào)控睡眠的作用［３］。筆者在前期研究的基礎(chǔ)上觀察施灸赫依三穴對**大鼠行為學(xué)變化及腦干內(nèi)ＩＬ－６ 含量的影響，進(jìn)一步探討其****的作用機(jī)制。

１ 材料與試藥

１．１   實(shí)驗(yàn)動物

實(shí)驗(yàn)動物選擇健康雄性 ＳＤ 大鼠６０ 只，體重約（２００± １０）ｇ，全部大鼠均由沈陽實(shí)驗(yàn)動物中心 提供，合 格證號：

（ＳＸＳＫ（遼）２０１５－０００１）。

１．２   試劑與儀器

ＺＢ－２００疲勞轉(zhuǎn)棒儀（北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司）；ＡＵＷ１２０Ｄ 型島津電子天平（日本島津）；定位航行試驗(yàn)水槽（北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司）；Ｂｉｏｔｅｋ Ｅｌｘ８００酶標(biāo)儀（美國Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司）；對氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）

（北京環(huán)亞太克生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司）；艾灸貼（蘇州東方艾絨廠）；ＩＬ－６酶聯(lián)**分析（ＥＬＩＳＡ）試劑盒（廣州瑞博奧生物科技有限公司）。

２ 方 法

２．１   造模方法

本實(shí)驗(yàn)采用公認(rèn)的對氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）造模法制備**大鼠模型［４］。將 ＰＣＰＡ 用生理鹽水配制成混懸液 

（４５ｍｇ／１００ｇ），除正常組外，其余組大鼠腹腔注射 ＰＣＰＡ 混懸液（１ｍｇ／１００ｇ），每天１次，連續(xù)注射２天。大鼠出現(xiàn)活動明顯頻繁，對外界的聲、光等刺激異常敏感，興奮性增高，晝伏夜出節(jié)律消失等，表明造模成功。

２．２   分組及處理方法

將６０只ＳＤ 雄性大鼠隨機(jī)分為６ 組，即正常組、模型組、安定組、頂會穴組、赫依穴組、黑白際穴組，每組１０只。每日１次，連續(xù)注射２日；與**組相同的抓取、固定，不做任何**，連續(xù)７天。模型組：造模成功后同灸療組一樣抓取，固定。安定組：造 模成功 后，采 用 安 定 （地 西 泮 ）注 射 液，０．９２ｍｇ／ｋｇ，每日１次，連續(xù)灌胃７天。頂會穴組：造模成功后施灸大鼠頂會穴，每日１ 次，連續(xù)７天。赫依穴組：造模成功后施灸大鼠赫依穴，每日１ 次，連續(xù)７天。黑白際穴組：造模成功后施灸大鼠黑白際穴，每日 １ 次，連續(xù)７天。

２．３   觀察指標(biāo)與檢測方法

轉(zhuǎn)棒平衡實(shí)驗(yàn)［５］ 實(shí)驗(yàn)裝置為單頭固定的水平直

２．３．１

棒。先將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)整到訓(xùn)練狀態(tài)，使各組大鼠適應(yīng)，再將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)到２０ｒ／ｍｉｎ，當(dāng)直棒轉(zhuǎn)動時(shí)，將大鼠放在轉(zhuǎn)棒上，記錄大鼠在轉(zhuǎn)棒上持續(xù)不落降的時(shí)間，每只大鼠重復(fù)測定３次，取平均值。

２．３．２  定位航行實(shí)驗(yàn)［６］        實(shí)驗(yàn)時(shí)向水箱里加入自來水和適量牛奶，使液體與水箱顏色一致，水平面高于站臺２ｃｍ，水溫控制在（２４±２）℃。實(shí)驗(yàn)前將各組大鼠放入水箱內(nèi)自由游泳，若１２０ｓ未找到站臺，人為將其移至到站臺上，使大鼠熟悉水箱內(nèi)環(huán)境。測試時(shí)將大鼠沿水箱壁輕巧放入水池，記錄大鼠找到站臺的時(shí)間，若大鼠放入水中１２０ｓ內(nèi)未找到站臺，以１２０ｓ計(jì)。

２．３．３  大鼠腦干中ＩＬ－６ 含量測定［７］ 將６ 組大鼠快速

斷頭處死，冰上迅速取大腦干稱重，－８０℃ 冰箱保存待測。取１００ｍｇ組織加入５００μＬ 裂解液，冰上裂解３０ｍｉｎ，每５ｍｉｎ振蕩１次，在冰上用高速分散切割機(jī)進(jìn)行組織破碎，冷凍離心機(jī)離心，１３０００ｒｐｍ，２０ｍｉｎ，取上清液。采用 ＥＬＩＳＡ 法，按照ＩＬ－６試劑盒說明書的步驟，在酶標(biāo)儀上的５４０～５９５ｎｍ波長范圍內(nèi)檢測吸光度，其中５６２ｎｍ 波長為*佳測量光密度值，計(jì)算出ＩＬ－６含量。

２．４   統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)錄入ＳＰＳＳ１７．０統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，連續(xù)性計(jì)量資料以平方差（珚 ）表示，數(shù)據(jù)比較使用獨(dú)立樣本 檢驗(yàn)。等級數(shù)據(jù)資料以百分比（％）表示，數(shù)據(jù)間比較采用卡方檢驗(yàn)。Ｐ＜０．０５為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

３ 結(jié) 果

３．１   各組大鼠轉(zhuǎn)棒平衡實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

與正常組相比，模型組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時(shí)間縮短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時(shí)間延長，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。見表１。

３．２   各組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

與正常組相比，模型組大鼠找到站臺的時(shí)間延長，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組大鼠找到站臺時(shí)間顯著縮短， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。見表２。

３．３   各組大鼠腦干中ＩＬ－６含量比較

與正常組相比，模型組大鼠腦干ＩＬ－６含量顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組大鼠腦干ＩＬ－６含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。見表３

４ 討 論

蒙醫(yī)理論認(rèn)為人體體素相搏導(dǎo)致無法正常入睡稱為**，屬于“赫依病”范疇。蒙醫(yī)灸療法具有通絡(luò)、**、**之功效。赫依三穴是指赫依穴、頂會穴、黑白際穴。赫依穴位于第七頸椎棘突與**胸椎棘突間隙窩中；頂會穴位于兩耳角直上連線中點(diǎn)，頭頂正中心；黑白際穴位于兩乳正中對直的心窩處［８］?！?/span>甘露四部》［９］中記載：“赫依偏盛引起的**以頂會穴、赫依穴、黑白際穴灸之。”