苗藥透骨香抗急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎作用的實(shí)驗(yàn)研究
陳應(yīng)康，佘福強(qiáng)，劉大騰，朱建超，劉 燕，田培燕
( 黔南民族醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，貴州 黔南 558000)
摘要 目的: 考察苗藥透骨香**急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用和可能機(jī)理。方法: 制備急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，并分為 5 組，分別為模型組、阿司匹林( 300 mg / kg) 陽(yáng)性對(duì)照組及透骨香低( 4 g / kg) 、中( 8 g / kg) 、高( 16 g / kg) 劑量組，另設(shè)正常對(duì)照組。所有大鼠連續(xù)給藥 10 d，檢測(cè)步態(tài)評(píng)分、足跖腫脹體積、痛閾、踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液中 K + 、 DA、NE、5-HT 含量及血清 PGE2 、LTB4 含量。結(jié)果: 與正常對(duì)照組比較，造模后 1 ～ 10 d 模型組的步態(tài)評(píng)分、足趾腫
脹體積及造模后 10 d 踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液 K + 、DA、NE、5-HT 含量和血清 PGE 、LTB 含量顯著升高( P ＜ 0. 05) ，痛閾顯著降低( P ＜ 0. 05) ，提示急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型制備成功，與模型組比較，透骨香各組步態(tài)評(píng)分、足跖腫脹體積及造模
后 10 d 踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液 K + 、DA、NE、5-HT 含量和血清 PGE 、LTB 含量不同程度降低，痛閾不同程度升高，其作用呈劑量依賴(lài)性。結(jié)論: 苗藥透骨香具有**急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用，能降低急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)
節(jié)液 K + 、DA、NE、5-HT 及血清 PGE 、LTB 含量。
關(guān)鍵詞 苗藥; 透骨香; 急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎
透骨香是杜鵑花科植物滇白珠 Gaultheria leuco- carpa Bl. var. crenulata( Kurz) T. Z. Hsu 的莖葉，四季均可采收，味辛，性溫，無(wú)毒。收載于 1990 年版《中國(guó)民族**志》**卷〔1〕和 2003 年版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》〔2〕，該藥具有**通絡(luò)、除 濕和**的功效，在**風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷和 濕疹方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)〔3〕。痛風(fēng)是嘌呤代謝紊 亂及尿酸排泄異常導(dǎo)致血尿酸水平升高的一種疾 病，當(dāng)尿酸濃度升高，極容易形成結(jié)晶并沉淀在關(guān)節(jié) 滑膜與滑膜周?chē)浗M織，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，這種反應(yīng)即為急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎( Acute Gouty Arthritis，AGA) ，臨床典型表現(xiàn)為關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛，反復(fù)發(fā)作。長(zhǎng)久 反復(fù)可致關(guān)節(jié)畸形、關(guān)節(jié)功能障礙，影響生活。臨床 常規(guī)應(yīng)用甾體類(lèi)**藥或**類(lèi)藥緩解癥狀，但長(zhǎng) 期反復(fù)使用這類(lèi)**易導(dǎo)致胃腸道不佳反應(yīng)，且易 復(fù)發(fā)，因此如何緩解并**急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是目 前臨床棘手的問(wèn)題。本研究考察了透骨香對(duì)急性痛 風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的療效及其可能機(jī)理，為苗藥透骨香的 臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料與方法
1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí) SD 大鼠，體質(zhì)量 180 ～ 220 g，購(gòu)自貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào): SCXK( 黔) 2002-0001。進(jìn)行試驗(yàn)前，在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 w，自由飲水?dāng)z食。
1. 2 **與試劑 透骨香購(gòu)自遵義市中藥材市場(chǎng)，經(jīng)黔南民族醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校魏學(xué)軍副教授鑒定為杜鵑花科植物滇白珠 Gaultheria leucocarpaBl. var. crenulata( Kurz) T. Z. Hsu 的干燥莖葉，取 60℃ 干燥致恒重的透骨香藥材 1 kg，置于不銹鋼桶中，加入沒(méi)過(guò)藥材的米醋浸潤(rùn)至透約 1. 0 h，再移至炒鍋，明火翻炒至藥材表面有焦斑，再加 5 倍量水，大火煮沸，小火維持微沸狀態(tài) 30 min，濾液后再煎 1次，2 次煎液混合，濃縮至生藥濃度 1 g / mL，用時(shí)稀釋至所需濃度; 阿司匹林腸溶片，批號(hào): 150411，江蘇平光制藥有限責(zé)任公司; 尿酸晶體，美國(guó) Sigma 公司; 生理鹽水注射液，華仁藥業(yè)有限公司; 多巴胺( Dopamine，DA ) 、去甲腎上腺素 ( Norepinephrine， NE) 、5-羥色胺( 5-hydroxytryptamine，5-HT) 、前列腺素 E2 ( ProstaglandinE2 ，PGE2 ) 、白三烯( LeukotrienesB4，LTB4 ) 試劑盒均購(gòu)自武漢博士徳生物工程有限公司。
1. 3 主要儀器 N4 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司; DB027 型鼠尾光照測(cè)痛儀，北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司。
2 方法
2. 1 動(dòng)物造模、分組及給藥 參考文獻(xiàn)方法〔4〕，將大鼠固定，暴露右側(cè)踝關(guān)節(jié)，碘伏**，在大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)以 45° 插至脛跗關(guān)節(jié)腔并注射 0. 1 mL 50 mg / mL 的尿酸鈉，即制成急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型。將急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為 5 組，分別為模型組、阿司匹林( 300 mg / kg) 陽(yáng)性對(duì)照組及透骨香低( 4 g / kg) 、中( 8 g / kg) 、高( 16 g /kg) 劑量組。另設(shè)正常對(duì)照組，同部位注射生理鹽水注射液 0. 1 mL。每組 10 只。各組灌胃相應(yīng)**，正常對(duì)照組和模型組灌胃等體積生理鹽水，給藥體積 10 mL / kg，1 次/ d，連續(xù)給藥 10 d。
2. 2 指標(biāo)檢測(cè)
2. 2. 1 步態(tài)評(píng)分 分別于給藥 1、5、10 d 給藥后 30 min 對(duì)各組大鼠步態(tài)進(jìn)行評(píng)分，分為 4 個(gè)級(jí)別，0 級(jí) ( 0 分) : 行走正常，Ⅰ級(jí)( 2 分) : 輕微跛行，右下肢略有彎曲; Ⅱ級(jí)( 4 分) : 中度跛行，右下肢剛觸及地面; Ⅲ級(jí)( 6 分) : 重度跛行，右下肢不能觸及地面，三足行走。
2. 2. 2 足趾腫脹體積: 分別測(cè)量給藥 1、5、10 d 給藥后 50 min 大鼠踝關(guān)節(jié)的體積，自制足趾腫脹體積檢測(cè)器，取三路活塞，分別命名 A、B、C 三端，A 端聯(lián)通 5 mL 注射器，B 端聯(lián)通 5 mL 倒置管相連，C 端鏈接溶液導(dǎo)管。將 C 端關(guān)閉，打開(kāi) A 和 B 端，將待測(cè)大鼠右后肢踝關(guān)節(jié)浸入倒置管，使水面平行于倒置管，取出大鼠，再打開(kāi) A 端，注滿(mǎn)倒置管，記錄 A 端注入倒置管的水體積，即為待測(cè)大鼠踝關(guān)節(jié)體積。
2. 2. 3 痛閾: 分別于 1、5、10 d 給藥后 40 min 記錄
動(dòng)物痛閾。方法如下: 在 20 ℃ 的安靜環(huán)境下，采用DB027 型鼠尾光照測(cè)痛儀，固定輻射熱燈，固定大鼠，使雙后肢暴露在燈下，距離燈約 3 cm 處照射，記錄從照射到大鼠出現(xiàn)熱痛縮腿反應(yīng)的時(shí)間即為痛閾時(shí)間。
2. 2. 4 踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液中 K + 濃度: 給藥 10 d，末次給藥 1 h 后處死大鼠，取右下肢的踝關(guān)節(jié)，約 0. 2 g， 置于 1 mL 生理鹽水 4 ℃ 浸泡過(guò)夜，10 000 r / mim 離心 10 min，取上清 0. 2 mL，采用比色法檢測(cè)，計(jì)算踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液中 K + 濃度。
K + 濃度( mmol / L) = 待測(cè)管光密度 × 標(biāo)準(zhǔn)濃度
2. 2. 5 踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液中 DA、NE 和 5-HT 含量: 處死大鼠，取右下肢的踝關(guān)節(jié)滑膜組織約 500 mg，嚴(yán)格按試劑盒的要求操作，檢測(cè)踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液中 DA、NE、5-HT 含量。
2. 2. 6 大鼠血清 PGE2 和 LTB4 含量: 處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血，離心得血清，按照說(shuō)明書(shū)步驟操作，以ELISA 法檢測(cè)血清中 PGE2 和 LTB4 含量。
2. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以 SPSS 19. 0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，其中計(jì)量資料以 x珋± s 表示，采用方差分析; 計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，設(shè)置 α = 0. 05 為檢測(cè)水平，以 P ＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 結(jié)果
3. 1 透骨香對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠步態(tài)評(píng)分的 影響結(jié)果如表 1 所示，與正常對(duì)照組比較，造模后第 1、5、10 天模型組步態(tài)評(píng)分顯著升高( P ＜ 0. 05) 。與模型組比較，透骨香中、高劑量組大鼠步態(tài)評(píng)分在 造模后第 1、5、10 天，低劑量組在第 10 天顯著降低( P ＜ 0. 05) ，且其作用呈劑量依賴(lài)性。
3. 2 透骨香對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠足跖腫脹的影響 結(jié)果如表 2 所示，與正常對(duì)照組比較，造模后第 1、5、10 天模型組足跖體積顯著升高( P ＜ 0. 05) 。與模型組比較，透骨香中、高劑量組大鼠足跖關(guān)節(jié)體積在造模后第 1、5、10 天顯著降低( P ＜ 0. 05) ，且其作用呈劑量依賴(lài)性
3. 3 透骨香對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠痛閾的影響結(jié)果如表 3 所示，與正常對(duì)照組比較，造模后第1、5、10 天模型組大鼠痛閾顯著降低( P ＜ 0. 05) 。與模型組比較，透骨香低劑量組在造模后第 5、10 天， 中、高劑量組大鼠在造模后第 1、5、10 天痛閾顯著升 高( P ＜ 0. 05) ，且其作用呈劑量依賴(lài)性。
3. 4 透骨香對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液 K + 、DA、NE、5-HT 含量的影響 結(jié)果如表 4 所示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液 K + 、DA、NE 及 5-HT 含量顯著升高( P ＜ 0. 05) 。與模型組比較，透骨香高劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液 K + 、DA、NE 及 5-HT 含量均顯著降低( P ＜ 0. 05 ) ， 且其作用呈劑量依賴(lài)性。
3. 5 透骨香對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清 PGE2 、LTB4 含量的影響 結(jié)果如表 5 所示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清 PGE2 、LTB4 含量顯著升高( P＜ 0. 05) 。與模型組比較，透骨香各劑量組大鼠血清PGE2 、LTB4 含量顯著降低( P ＜ 0. 05) 。且其作用呈劑量依賴(lài)性
1 討論
我國(guó)苗族、白族和彝族等少數(shù)民族均有應(yīng)用透骨草的經(jīng)驗(yàn)，該藥在**肌肉酸痛、風(fēng)濕病、腰椎骨質(zhì)增生、踝扭傷和風(fēng)濕痹痛等方面具有顯著功效〔3，4〕。
本課題結(jié)果顯示，苗藥透骨香具有**急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用，表現(xiàn)為改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的步態(tài)評(píng)分和足跖腫脹體積，其機(jī)理可能與降低踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液 K + 、DA、NE、5-HT 及血清 PGE 和LTB4 含量有關(guān)。透骨香**急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用可能與透骨香的化學(xué)成分有關(guān)〔5-7〕: 1) 透骨香的有效成分之一為水楊酸甲酯，與阿司匹林的結(jié)構(gòu)母核一致，因此具有阿司匹林等非甾體**類(lèi)**的藥效特征，周曉霞水楊酸甲酯含量約 0. 26% ，折算至本課題中透骨香組的水楊酸甲酯攝入量約 10 ～ 40 mg / kg，從摩爾數(shù)看遠(yuǎn)低于陽(yáng)**，因此透骨香雖然具有非甾體**藥的特征， 但用藥量較小，因此可以減少這類(lèi)**的胃腸道不 良反應(yīng)。2) 本課題結(jié)果顯示，雖然透骨香所含的水楊酸甲酯水平較低，但其高劑量**急性痛風(fēng)性關(guān) 節(jié)炎的效果與陽(yáng)**相當(dāng)，甚至在提高痛閾方面還 優(yōu)于陽(yáng)**組，可見(jiàn)還有其他成分的效應(yīng)。透骨香 的另外一種有效成分是兒茶素，動(dòng)物試驗(yàn)顯示兒茶 素 25 ～ 100 μg / mL 可顯著改善類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)局部腫痛和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和病理形態(tài)變化， 因兒茶素可抑制滑膜細(xì)胞分泌的炎癥因子，如 IL-1、TNF-α 和 PGE2 ，上調(diào)胞內(nèi) cAMP 水平，cAMP 可抑制滑膜細(xì)胞增殖，減輕類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的癥狀。3) 動(dòng)物試驗(yàn)顯示，以透骨香提取的揮發(fā)油制成的微乳對(duì)熱板法、扭體法和二甲苯致耳廓腫脹等方法制備的炎癥模型小鼠均有鎮(zhèn)痛**作用。
關(guān)于本課題中透骨香采用醋制的原因在于，文獻(xiàn)〔8，9〕顯示通過(guò)醋制、清炒、鹽制、生品和酒制等方法炮制透骨香，醋制法得到的水楊酸甲酯苷含量* 高，因此選擇醋制給藥。但揮發(fā)油也是透骨香的重 要有效成分，經(jīng)醋制會(huì)損失部分揮發(fā)油和兒茶素。可見(jiàn)炮制方法可影響透骨香的藥效發(fā)揮，因此本課 題下一步的研究方向在于考察炮制方法對(duì)于透骨香 在**急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的意義。
綜上所述，苗藥透骨香具有**急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用，降低踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液 K + 、DA、NE、5-HT 及血清 PGE2 ，LTB4 含量。
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