本文引用：韓遠(yuǎn)山，藺曉源，易剛強(qiáng)，王宇紅，楊 蕙，孟 盼，趙洪慶，杜 青.復(fù)方柴金解郁片對慢性應(yīng)激抑郁大鼠 HPA 軸及海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（3）：240-244.

復(fù)方柴金解郁片對慢性應(yīng)激抑郁大鼠HPA 軸及海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響

韓遠(yuǎn)山 1，藺曉源 1，易剛強(qiáng) 2*，王宇紅 2，楊 蕙 1，孟 盼 2，趙洪慶 2，杜 青 2

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)**附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南省中藥粉體與****省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南 長沙 410208）

〔摘要〕 目的 研究復(fù)方柴金解郁片對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠 HPA 軸及海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響，探討其可能的抗抑郁機(jī)制。 方法 將 SD 大鼠隨機(jī)分為 6 組：對照組、模型組、氟西汀組（5.4 mg/kg）、復(fù)方柴金解郁片高、中、低劑量組（2.74、1.37、

0.68 g/kg），采用慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激建立抑郁模型，于造模同時(shí)給藥，連續(xù) 28 d。采用蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)和曠場測試檢測大鼠的抑郁樣行為，Morris 水迷宮檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，HE 染色觀察大鼠海馬病理結(jié)果變化，ELISA 法檢測大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)**釋放**（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)**（ACTH）、皮質(zhì)酮（CORT），以及海馬 5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5- HIAA）、去甲腎上腺素（NA）、多巴胺（DA）的含量。 結(jié)果 與抑郁模型組比較，復(fù)方柴金解郁片組大鼠蔗糖偏嗜度及活動次數(shù)均顯著提高，學(xué)習(xí)記憶能力提升，海馬病理損傷情況得到緩解，血漿 CRH、ACTH、CORT 含量下降，海馬組織內(nèi) 5-HT、NA、DA 含量上升，5-HIAA 含量下降（P<0.05）。  結(jié)論   復(fù)方柴金解郁片能顯著改善模型大鼠情緒和學(xué)習(xí)記憶功能、緩解海馬組織損傷，其作用可能與抑制 HPA 軸亢進(jìn)、增加腦內(nèi)單胺遞質(zhì)含量有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 復(fù)方柴金解郁片；抑郁；慢性應(yīng)激；HPA 軸；海馬；單胺遞質(zhì)

〔中圖分類號〕R285.5 〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A 〔文章編號〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2017.03.003

抑郁癥是以情緒低落、興趣喪失、思維遲緩為主要特征的精神性**，具有高發(fā)病、高復(fù)發(fā)、高**、高醫(yī)療成本的特點(diǎn)。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA 軸）是機(jī)體一個(gè)重要的***軸，海馬是 HPA 軸負(fù)反饋的調(diào)節(jié)**，同時(shí)也是學(xué)習(xí)、 記憶以及引起情感障礙的關(guān)鍵腦區(qū)，HPA 軸失調(diào)依賴性的海馬神經(jīng)元損傷是抑郁產(chǎn)生的主 要驅(qū)動力[1-2]。 復(fù)方柴金解郁片（**授權(quán)號為 ZL20 1210126887.X）具有“疏肝**、**解郁”之功效， 臨床用于**輕、中度抑郁癥，療效顯著。 為了能更好地探明復(fù)方柴金解郁片的抗抑郁功效及其機(jī)制， 本研究以慢性不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁模型大鼠為研究 對象， 通過研究復(fù)方柴金解郁片對模型大鼠行為、HPA 軸指標(biāo)促腎上腺皮質(zhì)**釋放**（CRH）、促腎上腺皮質(zhì)**（ACTH）、皮質(zhì)酮（CORT）以及海馬單胺遞質(zhì) 5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、去甲腎上腺素（NA）、多巴胺（DA）的調(diào)控作用，探討其抗抑郁作用的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物

SPF 級雄性 SD 大鼠 75 只，體質(zhì)量 160～180 g， 由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供， 合格證號：No.11400700028228。許可證號：SCXK(湘) 2012-

0001。 在光/暗周期為 12 h/12 h （光照時(shí)間 7：00～

19：00）的條件下飼養(yǎng)于籠中，自由飲水和攝食。

1.2 **

復(fù)方柴金解郁片浸膏粉，相當(dāng)生藥量為 6.6 g 生藥/g（文中均按生藥量計(jì)算）(由湖南中醫(yī)藥大學(xué)**附屬醫(yī)院藥劑科提供，批號為 20121025)。 復(fù)方柴金解郁片臨床擬用**每日生藥量為 20.5 g。 鹽酸氟西汀分散片，Patheon France 生產(chǎn)，批號 2860A。

1.3 試劑與主要儀器

    5 -HT、5 -HIAA、NA、DA、ACTH、CRH、CORT  酶聯(lián)**試劑盒購自美國 R&D 公司；DB001 Morris 水迷宮購自北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司； MK3 型酶標(biāo)儀購自美國 Thermo；ET-12P 組織脫水機(jī)購自江西富華生物技術(shù)有限公司；RM223 切片機(jī)購自德國萊卡公司；DVP-W7 顯微鏡圖像處理系統(tǒng)購自南京民城信息系統(tǒng)公司。

1.4 分組與給藥

所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng) 3 d 后進(jìn)行蔗糖水消耗測試， 選取蔗糖水?dāng)z入量相近的 72 只大鼠隨機(jī)分為 6 組， 包括正常對照組、抑郁模型組、氟西汀組

（5.4 mg/kg）、 復(fù)方柴金解郁片高、 中、 低劑量組(2.74、1.37、0.68 g/kg)。 造模同時(shí)灌胃給藥， 每日 1 次，連續(xù) 28 d，對照組、模型組則給予等體積的蒸餾水。 末次給藥結(jié)束后，所有大鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測，檢測完成后用水合氯醛將大鼠麻醉，腹主動脈取血，取大鼠下丘腦、垂體、腎上腺等組織固定于 10%甲醛溶液中，冷凍臺上取海馬組織，液氮速凍，保存待用。

1.5造模

     采用慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激聯(lián)合孤養(yǎng)建立抑郁大鼠模型[3]，應(yīng)激方法包括冰水浴 4 min、禁食或禁水 24 h、50 V 電擊 3 min、 傾籠 24 h、 噪音

4 h、光照或黑暗 24 h、潮濕墊料 24 h、夾尾 1 min， 每天采用 1~2 種刺激，同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，軀體應(yīng)激每周限 1 次（電擊、夾尾），共 28 d，

期間動物均孤籠飼養(yǎng)。

1.6行為學(xué)測試

1.6.1 糖水偏嗜度 給藥 28 d 后，禁食禁水 24 h， 測定每組動物 4 h 內(nèi)的 1 %蔗糖水偏嗜度。 蔗糖偏嗜度=蔗糖水消耗量/( 蔗糖水消耗量+ 蒸餾水消耗量)×100%。

1.6.2 曠場實(shí)驗(yàn) 將大鼠放入高 40 cm，長寬為 80 cm 的測試敞箱，以大鼠在 3 min 內(nèi)穿越底面次數(shù)為水平得分（四爪均進(jìn)入方格），以直立次數(shù)為豎直得分（兩前爪離開底面）。 記錄大鼠水平得分和豎直得分的總和。

1.6.3 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn) Morris 水迷宮操作系統(tǒng)：直徑為 1.5 m 的圓形水池，平臺直徑為 0.15 m， 水深 0.4 m，平臺置于迷宮西南象限。 水面高出平臺3 cm，水溫保持(24±1) ℃。 于第 23 天開始對各組大鼠進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，訓(xùn)練 5 d，訓(xùn)練完成后記錄大鼠爬上平臺的潛伏期時(shí)間， 考查大鼠的學(xué)習(xí)能力；于第 28 天撤去平臺，   記錄大鼠進(jìn)入平臺所在象限的潛伏時(shí)間，考察大鼠的記憶能。

1.7 HE 染色
  取固定于 4%甲醛溶液中的組織， 常規(guī)石蠟包埋，切片，薄片用二甲苯和各級乙醇切片脫蠟水洗， 洗完后用蘇木素染色 5 min，蒸餾水沖洗至干凈，經(jīng)鹽酸乙醇分化和自來水浸泡后置伊紅液中 2 min， 純酒精脫水，二甲苯使之變透明，用加拿大樹膠封固，光學(xué)顯微鏡下觀察待檢測組織的病理情況。

采用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析， 數(shù)據(jù)以“x±s”表示， 采用 One-way-ANOVA 檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對抑郁大鼠糖水偏嗜度的影響

給藥前（造模前），各組大鼠糖水偏嗜度無明顯差異（P＞0.05）。 28 d 造模結(jié)束后，與對照組比較，模型組大鼠糖水偏嗜度明顯降低（P<0.01）；與模型組比較，氟西汀組、復(fù)方柴金解郁片高、中劑量組大鼠糖水偏嗜度明顯升高（P<0.01 或 P<0.05），結(jié)果見表 1。

2.2 對抑郁大鼠活動次數(shù)的影響

     與對照組比較，抑郁模型組大鼠自主活動次數(shù)顯著下降（P<0.01）。 與模型組比較，氟西汀組和復(fù)方柴金解郁片高劑量組大鼠總活動數(shù)明顯增加 （P<0.01）；同時(shí)，中劑量的復(fù)方柴金解郁片也能使模型大鼠活動次數(shù)增加（P<0.05）。 結(jié)果見表 2。

2.3 對抑郁大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

與對照組比較，模型組大鼠出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶障礙， 表現(xiàn)為爬上平臺潛伏期時(shí)間和進(jìn)入目標(biāo)象限所耗時(shí) 間均明顯延長（P<0.01）。 在給予氟西汀和高劑量的復(fù)方柴金解郁片后， 大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力均有所提升， 表現(xiàn)為找到平臺時(shí)間與進(jìn)入目標(biāo)象限時(shí)間均顯著降低（P<0.01 或 P<0.05）。 結(jié)果見表 2。

2.4 對抑郁大鼠血漿 ACTH、CRH、CORT 含量的影響與對照組比較，  模型組大鼠血漿 ACTH、CRH、CORT 均明顯升高(P＜0.01)。   與模型組比較，氟西汀組、復(fù)方柴金解郁片高劑量組大鼠 ACTH、CRH、CORT 含量均明顯下降 (P＜0.01 或 P＜0.05)；復(fù)方柴金解郁片中劑量組大鼠血漿 CORT 含量顯著下降 (P＜0.05)。結(jié)果見表 3。