抓力-加味滌痰湯灌胃對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響
劉曉婷1，2 ，陳維達3 ，陳澤濤3 ，王海濤2
( 1 山東中醫(yī)藥大學，濟南 250014; 2 濰坊市中醫(yī)院; 3 山東省中醫(yī)院)
摘要: 目的 探討加味滌痰湯灌胃對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響。方法選取 SPF 級雄性 SD大鼠 90 只，分為假手術組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組 5 組，每組大鼠 16 只。采用可逆性大鼠腦中動脈閉塞線栓法進行右側大腦中動脈栓塞( MCAO) ，于造模成功后 24 h 假手術組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高劑量組、中藥低劑量組分別灌胃加味滌痰湯 1． 92、0． 96 g / ( kg·d) ，西藥組灌胃吡拉西坦片 0． 5 g / ( kg·d) ，灌胃容積為 10 mL / kg; 1 次/ d，連續(xù)給藥 7 d。各組于**開始前及**結束 24 h 內進行神經行為學測試并記錄，于給藥周期結束 24 h 內，取腦組織切片、染色、拍照，計算各組梗死體積比及缺血側大腦水腫度。結果 **后神經障礙評分及平衡木行走實驗得分中藥高劑量組、西藥組與模型組比較明顯減低( P 均 ＜0． 05) ，中藥低劑量組*為顯著 ( P ＜ 0． 01) ; 中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組較模型組自發(fā)活動次數(shù)明顯增多( P 均 ＜ 0． 05) ，中藥高劑量組*為顯著( P ＜ 0． 01) ，中藥低劑量組及西藥組亦明顯增多( P 均 ＜0． 05 ) ，中藥高、低劑量組與西藥組比較，P 均 ＜0． 05; 中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組與模型組腦梗死體積相比均明顯降低( P 均 ＜ 0． 01) ; 中藥低劑量組、西藥組缺血側大腦水腫度明顯降低( P 均 ＜ 0． 01) 。結論 加味滌痰湯灌胃對缺血再灌注損傷大鼠神經功能有保護作用，能提高受累肢體肌力、恢復精巧運動，減少腦梗死體積。
關鍵詞: 腦缺血再灌注損傷; 加味滌痰湯; 中藥; 神經保護; 大鼠
doi: 10． 3969 / j． issn． 1002-266X． 2016． 41． 010
中圖分類號: Ｒ651． 1 文獻標志碼: A 文章編號: 1002-266X( 2016) 41-0036-03
缺血性腦卒中是腦血管病中*常見的一種類型，約占全部腦血管病的 80% 。腦缺血一定時間恢復血液供應后，其功能不但未能恢復，卻出現(xiàn)了更加 嚴重的腦功能障礙，稱為腦缺血再灌注( CIＲ) 損傷［1］。缺血再灌注損傷是缺血性腦卒中導致神經功能障礙的主要病理基礎，缺血性腦卒中屬于中醫(yī) “中風”范疇，出自《濟生方》的滌痰湯有滌痰開竅之功，是**急性期缺血性腦卒中的有效方劑。2015 年 1 月 ～ 2016 年 1 月，我們探討了加味滌痰湯灌胃對 CIＲ 損傷大鼠神經功能的影響。
1 材料與方法
1． 1 材料 雄性 SD 大鼠 90 只，SPF 級，體質量140 ～ 160 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK( 京)2012-0001，質量合格證號 NO． 011400700055671。2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 購于國藥集團化學試劑有限公司; 蘇木色精、曙紅 Y、甲苯胺藍等試劑均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司。實驗儀器系統(tǒng)冠狀切腦， 型號 68709，深圳瑞沃德公司; LEICA ＲM2245 切片機，LEICA HI1220 烤片機，LEICA XL 全自動染色機，OLYMPUS BX51 生物顯微鏡; FED53 恒溫干燥箱購自德國 Binder 公司; LEICA ASP200s 全自動全封閉脫水機，LEICAEG1150H 包埋機; 電熱恒溫鼓風干燥箱購自上海培因公司; 自發(fā)活動視頻分析系統(tǒng)和大小鼠抓力測定儀，購自北京智鼠多寶生物科技有限責任公司。中藥加味滌痰湯( 膽南星 12 g、石菖蒲、橘紅、梔子、枳實各 10 g，半夏 9 g，水蛭、生大黃各 6 g) ，采用北京康仁堂藥業(yè)全成分中藥配方顆粒，每劑 9． 6 g。西藥吡拉西坦片( 0． 4 g / 片) 購自山東仁和堂藥業(yè)有限公司。
1． 2 CIＲ 損傷模型建立與分組 以 10% 水合氯醛
按 3． 5 mL / kg 麻醉大鼠，按照 Clark 等［2］的方法，采用可逆性大鼠腦中動脈閉塞線栓法進行右側大腦中動脈栓塞( MCAO) 手術，縫合皮膚切口并**。假手術組除不插入線栓外過程相同。缺血 90 min 后拔出栓線進行再灌注［3］，再灌注 90 min 時進行神經功能障礙評分，參照 Longa 等［4］ 制定的標準進行評分，神經功能評分為1 ～ 3 分的MCAO 大鼠和0 分的假手術大鼠為本實驗選用。實驗共分為 5 組: 假手術組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組，假手術組選用 0 分的假手術大鼠 16 只，其余 4 組隨機選取造模成功大鼠各 16 只; 假手術組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高、低劑量組分別灌胃加味滌痰湯 1． 92、0． 96 g / ( kg·d) ，西藥組灌胃吡拉西坦片 0． 5 g / ( kg·d) ，灌胃容積為 10 mL / kg; 于造模成功后24 h 給藥，1 次/ d，連續(xù)給藥7 d，固體飼料和水自由攝取。
1． 3 神經行為學測試 各組于**開始前及**結束 24 h 內進行神經行為學測試并記錄。①神經功能障礙評分: 參照 Longa 等［4］ 制定的標準進行評分。②平衡木行走實驗［5］: 測定大鼠運動整合及協(xié)調能力，術前 1 周每天早晚各訓練 1 次，每次 10 min，使其能順利在平橫木上行走。平衡木長 80 cm、寬 2． 5 cm，平放在距離地面高 10 cm 處，參考 Feeney 的計分標準。③自發(fā)活動次數(shù)和抓力: 將每只大鼠單獨置于暗室之中，采用自發(fā)活動視頻分析 系統(tǒng)記錄 10 min 中內的自發(fā)活動次數(shù)，并用抓力測定儀對大鼠逐一進行抓力測試。術前 1 周每天早晚各訓練 1 次，使大鼠適應暗室及對抓力板抓握。④ 腦梗死體積比和缺血側大腦水腫度: 各組給藥周期結束 24 h 內進行神經行為學測試后將大鼠斷頭取腦，取用的腦組織置于冰浴中迅速切片，切片厚度 3 mm，37 ℃ 避光 TTC 染色約 30 min，取出腦片，拍照，用 Image-Pro Plus 6． 0 軟件處理圖片，計算各組梗死體積比 同時計算缺血側大腦水腫度 。
1． 4 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS17． 0 統(tǒng)計軟件。計量資料以 x珋± s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，多個樣本均數(shù)間的兩兩比較采用 LSD 法。P ＜0． 05 為差異有統(tǒng)計學意義。
2 結 果
2． 1 各組**前后神經功能障礙評分、平衡木行走實驗得分比較 見表 1。
2． 2 各組**前后自發(fā)活動次數(shù)和抓力測量結果比較 見表 2。
2． 3 各組**后腦梗死體積比和缺血側大腦水腫度比較 見表 3。
3 討 論
中醫(yī)認為中風的發(fā)生與“風、火、痰、瘀、虛”密切相關。其中痰是人體水液代謝失常而形成的病理產物，是中風發(fā)生過程中重要的致病因素，并能影響**的發(fā)展、轉歸。現(xiàn)代研究表明，CIＲ 損傷是一個多環(huán)節(jié)、多級聯(lián)的病理生理過程，與自由基的過度形成、神經細胞內鈣離子超載、興奮性氨基酸的細胞毒作用、炎性反應和細胞凋亡等多種機制相關［1］。目前研究應用的神經保護劑多是針對 CIＲ 損傷中的某一個環(huán)節(jié)起效［7］，但由于 CIＲ 損傷機制的復雜性，可能使用任何阻斷單一環(huán)節(jié)的**療效不佳。中藥復方具有化學成分多樣性、生物活性廣泛性的 特性，在阻斷 CIＲ 損傷發(fā)**展中可從多靶點、多層次、多環(huán)節(jié)發(fā)揮作用。
滌痰湯主治“中風痰迷心竅，舌強不能言”，臨床對急性缺血性腦卒中的**有確切療效［8］。本 研究采用加味滌痰湯，方中半夏燥濕化痰，膽南星祛 風痰而止痙，共為君藥; 橘紅化痰**，枳實主降氣、行痰濕，石菖蒲祛痰開竅; 梔子清熱瀉火，大黃瀉熱通便，水蛭**逐瘀通絡; 諸藥合用具有豁痰開竅、醒神通絡的功效。本研究發(fā)現(xiàn)，中藥高、低劑量組、西藥組大鼠在用藥周期結束后神經功能障礙評分、平衡木行走實驗得分、10 min 內自發(fā)活動次數(shù)及抓力均較模型組有所改善，表明滌痰湯無論高、低劑量 均能有效改善 MCAO 大鼠神經功能，提高受累肢體肌力，恢復受累肢體精巧運動功能。從**應用劑 量上看，中藥高、低劑量組均有明顯神經保護作用， 兩組比較差異無統(tǒng)計學意義，無明顯的量效關系。
中藥高、低劑量組及西藥組均能有效減少腦梗死體積，中藥低劑量組、西藥組缺血側大腦水腫度明顯降低，但中藥高劑量組腦水腫度未見明顯降低，這與神經行為學指標的改善并不完全一致。實驗中往往以腦梗死體積的變化作為評估干預**藥效的優(yōu)選標準，但亦常會有腦缺血模型動物的行為變化與腦組織病理改變間難以找到相關的聯(lián)系［9］，可能與壞死周圍水腫區(qū)神經細胞功能未完全喪失有關。
本研究證實，加味滌痰湯灌胃對 CIＲ 損傷大鼠
神經功能有保護作用，能提高受累肢體肌力、恢復精巧運動、減少腦梗死體積。